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說一說胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)研究中的重要作用
2020-05-18
胎牛血清采用心臟封閉穿刺的方法采自孕6～8月孕齡的健康母牛腹中的胎牛。通過生物材料合成吸附技術(shù)和低溫進(jìn)行前期處理，去除細(xì)菌、病毒、支原體、抗體等影響血清質(zhì)量的因素，然后再在凈化車間中進(jìn)行過濾分裝。胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calfserum,CS)采自出生10至14天的小牛。要說為什么很多細(xì)胞培養(yǎng)的科研人都用到胎牛血清，那就不得不說說胎牛血清那極為重要的作用。1.提供維持細(xì)...
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ELISA常見的組織樣本制備方法
2020-05-15
為了保證ELISA實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測，對收集后一周內(nèi)檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集樣本，在取材后講標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差，蛋白容易降解，直接影響實驗質(zhì)量，故應(yīng)避免反復(fù)凍融。不同的樣本請根據(jù)實際情況處理。樣品制備方法1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再...
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血清中的沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？
2020-04-26
細(xì)胞生長，我們的試驗以及經(jīng)驗表明沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點。過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因為在血清生產(chǎn)時后已經(jīng)經(jīng)過100nm或者40nm的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測，因此不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實驗室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭端。研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會比較警覺的去...
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外泌體在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用與研究
2020-04-16
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體*于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運...
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怎么處理牛血清白蛋白的常見問題
2020-03-25
牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護(hù)或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過1h時，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因為在不含牛血清白蛋白的反應(yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...
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蛋白酶K具有廣泛的底物特異性
2019-12-27
蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態(tài)的蛋白質(zhì)。蛋白酶K分離自一種可在角質(zhì)上生長的真菌白色側(cè)齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態(tài)的角質(zhì)（頭發(fā)），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點為帶有封閉氨基基團(tuán)、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對分子量約為29.3kDa,是一種切割...
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如何提取外泌體？都有哪些方法？
2019-11-26
外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載...
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如何解決胎牛血清使用中遇到的問題？
2019-11-15
如何儲存和解凍胎牛血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。按如下操作可避免沉...
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